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蛋白A+G琼脂糖凝胶(用于免疫沉淀)图片
产品货号:
YTB4395
中文名称:
蛋白A+G琼脂糖凝胶(用于免疫沉淀)
英文名称:
Protein A+G Agarose(Fast Flow, for IP)
产品规格:
2mL|10mL|50mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品主要用于免疫沉淀(IP)或免疫共沉淀(Co-IP),适合于免疫沉淀所有Protein A Agarose和Protein G Agarose单独可以免疫沉淀的抗体,包括human IgG1、IgG2、IgG3、IgG4,mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3,rat IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c,rabbit IgG,rabbit、goat多克隆抗体。本制品也可以用于抗体的纯化,配制在可以直接用于免疫沉淀和抗体纯化的适当溶液中,每毫升 中共含有0.25mL agarose beads (沉淀物)。


本制品中的重组Protein A和Protein G可与多数哺乳动物IgG的Fc端特异性结合,分子量分别为14kDa和22KDa。该重组Protein A和Protein G通过改造,仅保留了与IgG Fc端结合相关的氨基酸序列,去除了结合位点以外可能导致非特异性结合的序列,从而可以有效减少非特异性结合。每个Protein A分子和Protein G分子可分别结合2个和3个IgG分子。


本制品中的Protein A和Protein G共价连接到4%的高交联度、高流速琼脂糖(cross-linked,4% Agarose,Fast Flow)上,并按1:1比例混合。每毫升 Protein A+G agarose beads (沉淀物)中偶联有约10mg的重组Protein A和1mg的Protein G。每毫升 Protein A+G agarose beads (沉淀物)可以结合超过25mg human IgG。本制品中agarose beads的平均直径为90μm,抗体纯化时的推荐线性流速为50-300cm/h,耐压指数最高为0.3MPa。




Protein A是一种发现于金黄色葡萄球菌的细胞壁表面蛋白,分子量为42kDa;Protein G是C型或G型链球菌表达的免疫球蛋白结合蛋白。Protein A和Protein G功能相似,能特异性地与哺乳动物免疫球蛋白结合,结合的部位通常为免疫球蛋白的Fc区,但有资料显示Protein A也会和人VH3家族的Fab区结合,而Protein G有时与Fab区也有一定结合。同时,两者对于不同的免疫球蛋白亚类的结合能力有所不同。适当重组改造的Protein A、G与琼脂糖凝胶以一定的方式结合,可用于免疫沉淀或抗体的纯化。




组分2mL10mL50mL
Protein A+G Agarose2mL10mL50mL
说明书1份

保存:4℃,切勿冷冻,有效期1年。


本制品如果用于常规的免疫沉淀,每毫升 本制品(沉淀和溶液为1:3的混合物)可以免疫沉淀50次。


  • 请勿冷冻保存本制品。
  • Protein A+G Agarose使用前一定要充分重悬,即充分颠倒若干次使混合均匀。
  • 本制品含有微量防腐剂,不会影响常规的免疫沉淀和抗体纯化。但如果后续涉及酶活性测定,使用本制品前宜先用TBS等适当溶液洗涤Protein A+G agarose beads三次,以充分消除防腐剂可能产生的干扰。
  • 从蛋白样品收集开始,所有步骤中蛋白样品都必须在4℃或冰上操作。



  • 免疫沉淀(IP):
    • 蛋白样品的准备:
      • 对于10厘米细胞培养皿中的贴壁细胞,吸除细胞培养液,PBS洗涤一次,然后加入500μL至2mL细胞裂解液裂解细胞。可以使用WB及IP细胞裂解液或各种RIPA裂解液(YT609、YT610、YT611或YT612)等进行细胞的裂解。
      • 对于组织样品参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解。
      • 对于悬浮细胞,离心收集细胞后,PBS洗涤一次,然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。
        • 详细的裂解方法参考不同裂解液的详细使用方法。对于不同的培养器材,参考10厘米培养皿的裂解液的用量进行裂解。如果裂解获得的蛋白样品浓度过高,可以用裂解液或PBS适当稀释,如果蛋白样品浓度过低,在以后的裂解过程中宜适当减少裂解液的用量。
    • 去除非特异性结合(可选做):
      • 取200μL至1mL蛋白样品,蛋白量约为200μg至1mg,加入约1μg和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的普通IgG和20μL充分重悬的Protein A+G Agarose,4℃缓慢摇动30分钟至2小时。
      • 2500rpm(约1000g)离心5分钟,取上清用于后续的免疫沉淀。
        • 所谓种属相同的IgG是指,例如后续免疫沉淀时用的是小鼠IgG,则在本步骤中可以加入normal mouse IgG,如无normal IgG,可以加入其它不影响后续检测的其它mouse IgG类型的抗体。通过和normal IgG和Protein A+G Agarose的孵育,可以充分降低非特异性的结合,降低背景。
    • 免疫沉淀:
      • 加入0.2~2μg用于免疫沉淀的一抗,4℃缓慢摇动过夜。
      • 再加入20μL充分重悬的Protein A+G Agarose,4℃缓慢摇动1~3个小时(为方便后续的洗涤操作,可以把加入充分重悬的Protein A+G Agarose的量调整为40μL)。
      • 2500rpm(约1000g)离心5分钟,或瞬时高速离心,小心吸除上清,注意宁可留下少量上清也不能吸掉Protein A+G
        Agarose。
      • 用准备蛋白样品时的裂解液或PBS洗涤沉淀5次,裂解液或PBS的用量每次为0.5~1mL。洗涤时离心条件和吸除上清的要求同上面的步骤(c)。
      • 完成最后一次洗涤后,去除上清,加入20~40μL 1×SDS-PAGE电泳上样缓冲液Vortex重悬沉淀,瞬时高速离心把样品离心至管底。
      • 100℃或沸水浴处理3~5分钟,取部分或全部样品用于SDS-PAGE电泳,暂时不用的样品可以-20℃保存。
  • 免疫共沉淀(Co-IP):
    参考免疫沉淀的方法进行,但免疫共沉淀(Co-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品,但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。
  • 抗体纯化:
    • 准备工作:
      • 用0.45微米或0.2微米孔径的滤膜过滤所用的溶液。
      • 所有的溶液必须用超声等方法脱气(degas)。
      • 选择适当的纯化柱,用适当量的Protein A+G Agarose装填纯化柱。也可使用蛋白A+G琼脂糖纯化柱(1mL)蛋白A+G琼脂糖纯化柱(5mL)
      • 用10~20倍柱体积的TBS洗涤并平衡纯化柱,流速可以用恒流泵控制为1mL/min (1mL预装柱)。如无恒流泵,也可以完全依靠重力洗涤并平衡纯化柱。
    • 抗体纯化:
      • 把含有待纯化的抗体上样到纯化柱。
      • 待纯化的抗体过柱后,用10~20倍柱体积的TBS洗涤,以去除未结合和非特异性结合的蛋白。洗涤是否完全可以通过测定280nm的吸光度进行确定。
      • 洗涤完后,用10mL 50mM glycine,pH2.7作为洗脱液,洗脱结合的抗体。某些抗体和Protein A+G的结合能力很强,在pH2.7时洗脱效果不太理想,可以使用50mM glycine,pH1.9作为洗脱液。分管收集洗脱下的抗体,根据蛋白浓度或后续的检测效果确定洗脱峰在哪几个收集管中。
    • 纯化柱的再生:
      • 用10~20倍柱体积的TBS洗涤纯化柱,使纯化柱达到中性的pH。
      • 用TBS来保存再生的纯化柱。

相关搜索:蛋白A+G琼脂糖凝胶(用于免疫沉淀)蛋白A+GProtein A+G琼脂糖凝胶抗体纯化免疫沉淀免疫共沉淀Protein A+G Agarose(Fast Flow, for IP)
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